馮欣、杜小偉、周鋼、王棟、仲格嘉：西藏林芝地區(qū)產(chǎn)紅花中的8種重金屬及2種有效成分的質(zhì)量研究

紅花為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花，夏季花由黃變紅時采摘，陰干或曬干。紅花含有黃酮、查爾酮、生物堿等多種活性成分［1-3］，是中藥、藏藥共有的大品種藥材，但是中、藏醫(yī)對其功效認識不盡相同。中醫(yī)用其活血通經(jīng)，散瘀止痛之效，現(xiàn)代研究也表明，紅花中主要含有抗凝血、抗血小板形成等作用［2，4］，主要用于治療心腦血管疾病。而藏醫(yī)《四部醫(yī)典》記載其“封閉脈口，治療一切肝病”，廣泛應用于二十五味松石丸、七味鐵屑丸等治療肝病的藏成藥中，因而被譽為保肝圣藥?，F(xiàn)代研究也表明，紅花提取物具有保肝、抗肝纖維化的作用［2］。我國紅花栽培歷史悠久，主要產(chǎn)地為新疆、甘肅、河南、山東、四川等地［5］。西藏林芝地區(qū)位于我國青藏高原的西南部，海拔2500～3000m，是藏藥材的主要產(chǎn)地，紅花等藏藥材種植歷史悠久，但尚未有學者對青藏高原等高海拔地區(qū)種植的紅花進行研究和報道。本課題采用《中國藥典》(2010年版)“紅花”項下的各項指標為標準，對該地區(qū)的紅花質(zhì)量進行研究。同時由于其他紅花主產(chǎn)區(qū)環(huán)境污染，包括人為等因素所致環(huán)境中的重金屬有害元素含量增加，會導致藥材品質(zhì)的降低，還有可能危害到人體健康，所以本文采用ICP-MS對該地區(qū)紅花中的鉛(Pb)、砷(As)、鎘(Cd)、鉻(Cr)、鈹(Be)、鉈(Tl)、碲(Te)、釹(Nd)等主要重金屬進行了研究。項研究旨在為評價該地區(qū)紅花中重金屬有害元素含量及其藥材質(zhì)量提供一定科學依據(jù)，為促進當?shù)夭厮幉暮侠硎褂煤徒】蛋l(fā)展奠定基礎。

1 材料

Agilent 7500ce型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀；LC-20AT高效液相色譜儀；Sartorius BP211D天平；Mars xpress微波消解儀；BHW-09C型加熱板；Labtech H210 型循環(huán)冷卻水泵。

鈹(Be)、鎘(Cd)、砷(As)、鉈(Tl)、鉻(Cr)、碲(Te)、釹(Nd)、鉛(Pb)標準物質(zhì)，均來自中國計量科學研究院。(批號分別為GSB 04-1718-2004，GBW08612 12106，GSB 04-1758-2004，GBW08614 13041，GBW(E)080117 12111，GBW(E)080548 11101，BW3134 1004，GBW08619 12062)國家一級標準物質(zhì)楊樹葉(地礦部物化探研究所GBW07604)P/A調(diào)諧液濃度(10% HNO3 介質(zhì)，Agi-lent)。調(diào)諧液(2% HNO3介質(zhì)，Agilent，批號5184-3566)；羥基紅花黃色素A對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號111637-200502)；山柰素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110861-200405);硝酸BVIII級；甲醇、乙腈為色譜純；磷酸為分析純；蒸餾水與純凈水(實驗室自制)；各個批紅花樣品均自采于中國藏學研究中心西藏林芝藏藥材種植實驗基地，1批樣品于采用新疆昌吉，后經(jīng)內(nèi)蒙古藥檢所周凱教授鑒定為紅花C.tinctorius的干燥花。樣品保存于中國藏學研究中心藏醫(yī)藥研究所。

2 方法與結(jié)果

2.1 重金屬研究的方法與結(jié)果

2.1.1 儀器設定參數(shù) RF功率為1200W，冷卻氣流量為20L·min-1，載氣為1.08L·min-1，采樣深度為7.5mm，蠕動泵快速提升速度為0.3r·s-1維持30s，蠕動泵分析前穩(wěn)定轉(zhuǎn)速為0.1r·s-1維持30s，數(shù)據(jù)采集時間約為3s。

2.1.2 內(nèi)標溶液的制備 精密吸取鈧(Sc)、釔(Y)、銦(In)、鉍(Bi) 的單元素標準溶液適量，以1%硝酸逐級稀釋成質(zhì)量濃度為1mg·L-1的混合溶液，搖勻，即得。

2.1.3 標準溶液的配制 精密吸取8種待測元素的單元素標準溶液適量，用1%硝酸溶液逐步稀釋成不同的濃度。以1%硝酸溶液作為標準空白溶液，見表1。

2.1.4 標準曲線及供試品測定 用定量分析方法對2.1.3項下配制的不同濃度標準溶液和2.1.6項下供試品溶液測定。測定時，儀器的內(nèi)標管始終插在內(nèi)標溶液中，依次將儀器的樣品管插入各個濃度的標準溶液(包括空白溶液)中進行測定，以每一濃度3次讀數(shù)的平均值為縱坐標，相應的濃度為橫坐標作標準曲線。再將樣品管插入供試品溶液進行測定。線性范圍為0～50μg·L--1，見表2。

2.1.5 方法的檢出限 方法的檢出限和該方法所選用的空白溶液和試驗操作中儀器設備有關。本方法以1%的硝酸溶液作為空白溶液。平行測定空白溶液11次，計算每種元素的標準偏差(R2)，3R對應的濃度即為各元素的檢出限，本方法中各元素檢出限都在0.019～0.561μg·L-1。

2.1.6 供試品制備 取本品0.1g，精密稱定，置于聚四氟乙烯內(nèi)管中，加8mL硝酸和2mL過氧化氫，放置2h后，置微波消解裝置中消解，消解程序，見表3。而后冷卻，用水將溶液轉(zhuǎn)移至50mL聚四氟乙烯的量瓶中并定容至刻度，搖勻，供ICP-MS測定。

2.1.7 重復性試驗 精密稱取紅花粉末0.1g，按2.1.6 項下的規(guī)定操作，平行實驗5份，測定，計算各元素含量的平均值及RSD。各元素的RSD都小于10%，表明重復性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗 精密稱取樣品粉末(過4號篩)約0.1g于消解罐，并精密加入等量的各元素儲備液適量，按2.1.6項下的規(guī)定操作，平行實驗5份，測定，以加標前后測定的含量平均值計算各元素的回收率，見表4。各元素的回收率在83.6%～109.2%，能滿足實驗的要求。

2.1.9 隨行標準物質(zhì)測定 實驗隨行測定國家一級標準物質(zhì)楊樹葉，進一步論證方法的準確性。精密稱取標準物質(zhì)茶葉約0.10g，按2.1.6項下的規(guī)定操作，平行實驗5份，測定，計算各元素含量的平均值及RSD均在標準值規(guī)定的范圍內(nèi)。

2.1.10 供試品分析 精密稱取供試品0.10g，按2.1.6項下的規(guī)定操作，平行實驗2份，測定，計算含量，見表5。

2.2 羥基紅花黃色素A的測定［1］

2.2.1 色譜條件YMC C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸水溶液(26∶2∶72)；檢測波長403nm；流速1.0mL·min-1；柱溫30℃；進樣量10μL。

2.2.2 對照品溶液的制備 取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成0.131g·L-1的溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過3號篩)0.40g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率300W，頻率50kHz)40min，放冷，再稱定質(zhì)量，用25%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述方法進行測定，見圖1。羥基紅花黃色素A歷年測定結(jié)果，見表6，2014年度不同采收期測定，見表7。

2.3 山柰素的測定［1］

2.3.1 色譜條件YMC C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為甲醇-0.4%磷酸水溶液(52∶48);檢測波長367nm；體積流量1.0mL·min-1；柱溫30℃;進樣量10μL。

2.3.2 對照品溶液的制備 取山柰素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.10g·L-1的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過3號篩)約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定質(zhì)量，加熱回流30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足失重，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液15mL，置平底燒瓶中，加鹽酸溶液(15～37)5mL，搖勻，置水浴中加熱水解30min，立即冷卻，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述方法進行測定，見圖2。山柰素歷年測定，見表6，2014年度不同采收期測定，見表7。

3 討論

由各批紅花中的重金屬含量結(jié)果可知，該地區(qū)紅花中所含的砷、鉛重金屬含量較少［11］?？赡芘c該地區(qū)地處青藏高原，環(huán)境污染較少有關，為西藏林芝地區(qū)紅花的作為優(yōu)良產(chǎn)區(qū)提供一定科研數(shù)據(jù)。

通過紅花樣品中羥基紅花黃色素A和山柰素的測定結(jié)果可知，該地區(qū)收集的紅花樣品，其羥基紅花黃色素A和山柰素的含量均高于藥典標準。

該產(chǎn)地紅花2014年不同采收期數(shù)據(jù)推斷，羥基紅花黃色素A的含量受采收期影響較??；山柰素的含量受采收期影響較大，可作為最佳采摘季節(jié)提供依據(jù)。

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